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基于金鸡纳碱胺的四重化学标记结合液质联用分析手性羧酸

手性羧酸；液相色谱质谱联用；金鸡纳碱；准确定量

手性羧酸是一类重要的代谢物，广泛存在于人体的各个组织，器官及其中1。不同构型的手性羧酸异构体通过不同的代谢路径产生，通常具有不同的生物学活性。例如，R-3-羟基丁酸作为酮体之一，可为机体提供能量，还可以作为GPR激活剂和HDAC抑制剂2，而S-3-羟基丁酸具有抗痉挛活性。同时，代谢疾病的发生发展往往涉及多种代谢物的变化，因此，多种手性羧酸同时检测方法的建立十分重要。不同构型的手性羧酸含量差异大，所以，分别定量对映异构体十分重要。但现有的报导中所分离的内源性手性羧酸的数目有限。基于金鸡纳碱类骨架作为手性柱固定相和手性添加剂在分离手性羧酸方面的应用3，我们推测该金鸡纳碱胺同样可以作为手性衍生化试剂来标记并分离手性羧酸，而且这类结构质谱响应较好，疏水性强，可以提高羧酸的检测灵敏度，并增强色谱保留。本次工作中，我们利用金鸡纳碱胺的4种类似物为手性衍生化试剂，结合多重化学标记，建立了一种内源性手性羧酸的高灵敏度，高选择性，高通量的检测方法。我们选定其中一种金鸡纳碱胺试剂标记的手性羧酸作为共享的内标，其他三种金鸡纳碱胺试剂分别标记三份生物样品，提高了通量。经金鸡纳碱胺类衍生化试剂标记后，手性羧酸的检测灵敏度大大提高，色谱分离得到改善。最后，我们利用该方法在3种人体细胞中均检测到了11种手性羧酸，在10 μL人体血清中检测到了9种手性羧酸，并同时检测了二型糖尿病（T2DM）和结直肠癌（CRC）患者血清中手性羧酸相比正常人的变化情况，分别发现了5种和4种T2DM和CRC相关的潜在的生物标志物。总之，我们建立了一种高通量的内源性手性羧酸分析方法。