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贵妃蚌肝素分离纯化、结构表征及活性研究

肝素；贝类；结构表征；抗凝活性；纤溶活性；出血效应

为研究和开发海洋生物源肝素，本研究采用酶解醇沉法和大孔树脂分离纯化法从贵妃蚌中提取、分离出肝素，采用高效液相色谱(High performance liquid chromatography, HPLC)，红外光谱(infrared spectrometry, IR), 核磁共振光谱(nuclear magnetic resonance spectroscopy) 对其结构特性进行分析，通过测定凝血三项指标（APTT、PT、TT）评价其抗凝血活性，通过纤维蛋白平板实验评价其体外纤溶活性，通过测定贵妃蚌肝素对大鼠血清中u-PA、t-PA和PAI-1含量的影响评价其体内纤溶活性，通过小鼠断尾实验评价其出血效应。结果表明，贵妃蚌肝素分子量为109.59kDa，其主要结构片段为→4)-α-IdoA2S-(1→4)-α-GlcNS3S6S-(1→和→4)-β-GlcA-(1→4)-α-GlcNS3S6S-(1→，活性实验表明贵妃蚌肝素效价为149.63 IU/mg，主要通过内源性凝血途径、外源性凝血途径和抑制纤维蛋白原转化为纤维蛋白而发挥抗凝血作用；贵妃蚌肝素纤溶活性为1416.91 IU/g，主要通过促进t-PA释放和抑制PAI-1分泌而发挥纤溶作用。与哺乳动物肝素相比，贵妃蚌肝素具有更低的出血效应，且具有良好的抗凝血作用及纤溶活性，可为开发抗血栓相关功效产品提供参考。