59 / 2018-11-19 20:49:22

基于超滤管辅助纯化的糖胺衍生对N-糖高效液相色谱荧光分析

N-糖基化；糖胺标记；超滤管辅助纯化；亲水性相互作用色谱荧光分析

对糖蛋白中的N-糖基化进行高效分析意义重大，然而利用液相色谱或质谱对蛋白质N-糖基化定性和定量分析的现有的方法繁琐且费时具有较大的局限性和挑战性。作为一种选择，糖胺标记结合快速N-去糖基化放是一种简化N-聚糖制备的有效方法。[1]
在本研究中，我们提出了一种在糖胺标记的过程中采用超滤管辅助纯化（FAP）标记后的糖，用于超快速和简单N-聚糖的荧光分析方法。与先前用于糖胺标记纯化过程中的亲水相互作用固相萃取纯化方法相比，FAP更有效和灵敏，并且提高了N-糖的回收率。
显著地，利用此方法整个N-聚糖包括中性和酸性的聚糖准备过程能在60分钟完成，并且可以进行直接的HPLC分析。与传统方法相比，制备时间减少了30倍，信号强度增加了12倍。最后对人血清中分离的转铁蛋白和单克隆抗体进行N-聚糖的进一步研究，表明该方法在对复杂样品简单快速地分析N-聚糖也是适用的。