56 / 2018-11-19 14:19:25

磁珠定向固定PNGase F及其在糖组学上的应用

PNGase F, 磁珠，微波辅助

肽-N-糖苷酶F（Peptide-N-glycosidase F，PNGase F）作为从糖蛋白中释放N-聚糖的重要工具酶之一，引起了科学家的广泛关注[1]。尽管PNGase F已广泛用于均相反应过程（样品及酶均在溶液中）[2]，但是目前工业化中，对酶的固定化方法的需求日益增长。而且，磁珠因比表面积大，易于分离，非特异性吸附小，常作为酶固定相[3]。在我们的工作中，引入了一种有效且定向的策略，通过在酶的表达过程中共表达的组氨酸标签，与亚氨基二乙酸和镍功能化修饰的磁珠特异性相互作用来固定PNGase F[4]。结果显示，定向固定的PNGase F具有比游离酶更强的酶活能力。与通过用羧基修饰的磁性颗粒的传统非定向固定相比，定向固定化方法可以负载更多的PNGase F，并且固定的材料可以多次负载PNGase F。在重复性的使用上，PNGase F的定向和非定向固定都可以重复使用五次以上，具有几乎相同的活性。微波辐射辅助下，通过定向固定的PNGase F释放N-聚糖的过程明显加速[5]，表明定向固定的PNGase F可作为一种有效和高效酶切反应体系，并应用于高通量的N-聚糖分析。